第12-19步

徠卡101

取材

從患者到病理學家，準備樣本進行診斷需要細心、經驗以及合理的流程。

 

徠卡特地為大家整理了取材、組織處理、包埋、切片以及染色等（常規、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡單地獲得實驗方案，避免錯誤的發生。

 

步驟十二

檢查固定的狀態

🙆 正確：先進行樣品固定狀態的檢查，特別是大樣本；

🙅 錯誤：樣品沒有檢查固定的狀態就直接進行脫水。
 

容器中的樣本需及時檢查固定狀態，以確保合適的固定。

 

步驟十三

制備薄片

🙆 正確：大標本需切成薄片（厚約3-4 mm）且厚度要均一，質地致密的組織尤其重要；

🙅 錯誤：切片厚度≥6mm，厚度不均一。

圖示為腫塊脫水切片薄（2-3mm）且均一。此切片能進行有效的脫水并且易于切成蠟片。

 

步驟十四

避免樣本損傷

🙆 正確：仔細處理樣本，特別是沒有充分固定的組織樣本（輕拿、不擠壓、使用鋒利的刀片）；

🙅 錯誤：樣品沒有考慮到固定的狀態就隨便拿取，有時候還使用鈍的刀進行取材。

H&E染色的肺：使用鉗子隨意夾取組織，引起組織局部有明顯的損傷。新鮮的或者固定不充分的組織很容易受損，即使是一些固定充分的組織也會因隨意夾取而受損。

 

步驟十五

避免交叉污染

🙆 正確：每一個樣本都放在干凈的器皿里，避免樣本和樣本間的交叉污染；

🙅 錯誤：不同組織樣本在取材的時候，取材板不干凈，這會導致不同樣本間的交叉污染。尤其是前后進行同一類型標本取材時尤其重要，如果發生攜帶污染可能會將惡性組織混入良性組織中。

H&E染色肺：含有肝的碎屑，在取材過程中被污染的。

 

步驟十六

小心使用活檢墊

🙆 正確：新鮮或者固定不充分的樣本沒有包在泡沫活檢墊中，特別是空心針活檢（避免活檢墊的人工損傷）；

🙅 錯誤：有時候小的、新鮮的或者固定不充分的樣本被放在活檢墊中，然后裝入包埋盒進行固定，這會引起典型的人工“假象”。

新鮮的或者固定不充分的組織在脫水過程中使用泡沫活檢墊，活檢墊會對組織產生局部壓力，導致細胞結構變化，形成可見的三角空間結構。

 

步驟十七

選擇合適的包埋盒

🙆 正確：不同類型的組織樣本使用合適的包埋盒進行脫水。組織碎片在脫水過程中容易皺縮，如果包埋盒過大的話，碎片會漏到脫水試劑中，甚至轉移到其他樣本中；

🙅 錯誤：“一種大小滿足所有”：一個包埋盒放置所有大小的樣本。

A. 一些小的組織碎片從包埋盒中漏出，脫水過程（組織會發生皺縮）該現象特別容易發生；
B. 合適大小的包埋盒放置合適大小的組織。

 

步驟十八

避免包埋盒超載

🙆 正確：從不讓包埋盒超載，如果組織太大的話，使用第二個包埋盒；

🙅 錯誤：組織充滿包埋盒，這會阻礙脫水試劑的流通，導致脫水效果差。有時可能導致樣本變形。

圖中包埋盒都超載了，如果繼續進行脫水的話，有可能導致樣本變形或者脫水不充分。

 

步驟十九

準確、清楚地標記包埋盒

🙆 正確：為了更準確地識別樣本，包埋盒必須進行清楚的標記；

🙅 錯誤：有時候很難去辨識包埋盒上的標記，只能猜測其內容。

A. 標記模糊不清的包埋盒均不能使用；

B. 徠卡打號機處理的包埋盒標記清晰可辨。

 

接下來我們將會為大家帶來組織脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色等操作流程小貼士，感興趣的話可以關注我們徠卡101系列，后續我們將會為您奉上更詳盡的內容。

 

 

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