Sapphire與生命活動大事件-錯配修復
瀏覽次數:1871 發布日期:2019-12-20
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【導讀】
錯配修復(mismatch repair,MMR):在含有錯配堿基的DNA分子中,使正常核苷酸序列恢復的修復方式;主要用來糾正DNA雙螺旋上錯配的堿基對。錯配修復的過程需要區分母鏈和子鏈,做到只切除子鏈上錯誤的核苷酸,而不會切除母鏈上本來就正常的核苷酸,屬于復制時修復。
【背景知識】
原核生物比如大腸桿菌的錯配修復系統是由Mut基因編碼的Mut S,Mut H和Mut L蛋白構成,其中Mut S和Mut L會形成四聚體Mut SL,在DNA上滑動,如果遇到堿基對錯配引起的隆起,就會停留,開始把兩邊的DNA雙鏈拉扯,成環,直到識別到GATC序列,如果A的N6發生甲基化,說明是母鏈,不切除,而如果GATC的A沒有甲基化,說明是子鏈,Mut H就會結合在Mut SL上。Mut H有核酸內切酶活性,在GATC序列的5’端,也就是G的左邊切開,再由DNase I發揮外切酶活性,把Mut SL四聚體擰出的環全部切除,再由DNA POL III和DNA連接酶重新填補。
歷史重構研究指出大腸桿菌使用EcMutS,EcMutL,EcMutH,EcUvrD,EcSSB和四個ssDNA核酸外切酶之一來實現切除。最近,中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所有了新的發現。
研究指出,最近的單分子圖像揭示了EcMutS和EcMutL在錯配的DNA上形成了級聯的滑動夾,共同協助EcMutH在遠程的新復制的GATC位點引入ssDNA斷裂。研究人員已經成功可視化了完整的鏈特異性切除過程,并發現長壽命的EcMutL滑動夾在ssDNA斷裂附近捕獲了EcUvrD解旋酶,從而顯著提高了其解鏈能力。在這一過程中,EcSSB調節EcMutL-EcUvrD解旋,并且這一過程很少伴隨著廣泛的ssDNA外切酶消化。這一結果與一種依賴于EcMut- EcUvrD解旋酶驅動的ssDNA片段在鄰近EcMut-GATC切口之間的移位,并且與外切酶無關的MMR鏈切除機制一致。
在這一研究中,科研人員通過美國Azure公司的SapphireTM雙模式多光譜激光成像系統對核酸外切酶的活性進行了研究。
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