在《J Proteomics》期刊雜志中2020年2月刊發了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章綜述,其中指出Western blotting已經有40多年的歷史,仍然是現在單一蛋白常用的分析技術,但因為其數據重復性、穩定性和定量的精準性引起科研界的關注,其數據可以通過研究方法的進步,儀器的提升,期刊雜志的對數據新要求的變化,使Western blotting數據的重現性和精準度都有所提高。
那我們看看期刊雜志對提交的Western blotting數據都做了哪些要求:
1. 不建議跑平行膠,因為平行膠和剝離膜,孵育體系,操作條件的不一致,影響定量的準確性,因此最好內參和目的蛋白要在同一張印跡膜上。
2. 選擇寬動態范圍的方法,確認信號強度與所上樣量之間的線性關系,例如用膠片做化學發光方法的動態范圍就很窄,不建議使用。
數字成像相比膠片動態范圍更寬,定量更準確
3. 強烈推薦使用總蛋白進行歸一化,因為看家蛋白容易受處理條件影響而發生變化,影響定量的結果,使用總蛋白定量更真實地反映目標蛋白表達量的變化。
4. 提交原始數據,例如:JBC,PLOS和CELL等雜志都要求要提供原始數據。
對于化學發光為主,經費預算又有限的用戶,Azure同樣給出一個適合的配置,那就是Azure300Q:
♣ Azure300Q帶有Q模塊,可激發AzureRed等染料進行全蛋白定量,最后化學發光條帶和總蛋白條帶同時在一張膜上成像,滿足Nature,JBC等期刊雜志的總蛋白定量要求,幫助用戶發表文章。
♣ 同時Q模塊還可以激發例如Cy3,AzureSpectra550,AlexaFluor546,Qdot565,羅丹明等染料,還可以做熒光內參與化學發光條帶同時在一張印跡膜上成像,熒光動態范圍更寬,相比于傳統的化學發光內參定量更準確。
熒光內參和化學發光同時成像
♣ Azure300Q標配9.1MP的高分辨CCD,動態范圍可達4.8OD,保證結果的準確性。
過飽和檢測可防止定量誤差,相同的印跡膜分別使用膠片成像和Azure成像系統,
Azure成像系統具有過飽和提醒,自動計算曝光時間以避免飽和。
♣ Azure300Q可進行自動彩色Marker與化學發光條帶的整合,符合期刊雜志中不過度裁剪Marker的要求,分子量查看更直觀。
彩色Marker與化學發光條帶成像
♣ Azure300Q成像系統提供16bit的tiff原始圖,將更真實的數據給到客戶,保證結果的真實性和可靠性。
♣ Azure300Q還可以做考馬斯亮藍染色的蛋白膠、核酸膠、銀染膠等成像。