做Western Blot的小伙伴，是不是還在為歸一化方法而糾結呢？今天小編就和大家匯總一下看家蛋白和總蛋白歸一化的方法。

看家蛋白歸一化

使用看家蛋白的最大缺點是在樣品間和不同條件下表達水平可能不一致。如使用看家蛋白進行標準化，必須先花費時間和精力來驗證內參的選擇。

使用看家蛋白的第二個重大挑戰是它們的表達豐度很高，如果樣品中的看家蛋白表達非常高，這會限制在凝膠上加載的樣品量，如果感興趣的蛋白不是同樣的表達豐度，那這兩種蛋白質就不在同一線性檢測范圍內。

如果您正在進行多重蛋白印跡，例如比較同一蛋白質的磷酸化和非磷酸化形式，則需要考慮的第三個挑戰是從不同物種中產生一抗和二抗的復雜性。

最后，檢測的看家蛋白可能干擾感興趣蛋白的檢測。理想情況下，看家蛋白應該與感興趣蛋白的大小不同，因此這兩種蛋白可在印跡上空間分辨。當實驗在同一印跡上檢查多種目的蛋白時，這就變得越來越困難。

總蛋白歸一化

使用總蛋白歸一化，是直接在膜上檢測總蛋白，并且該值在歸一化時用作分母。總蛋白染色提供更寬的動態范圍，并且表現出比看家蛋白更低的可變性和更精準的定量數據。

與使用看家蛋白相比，圖像采集后的分析工作流程基本不變; 整個泳道或泳道中大部分信號用于歸一化，而不是單一的條帶。

例如：JBC、Narute和Proteomics等期刊會推薦使用總蛋白歸一化方法。

使用總蛋白染色劑對膜進行染色提供了質控優勢，可以驗證轉印是否完全。

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