PCR基因擴增儀的分類眾多，如何選擇合適自己實驗的那個它

瀏覽次數：3410　發布日期：2021-7-19　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

什么是PCR

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發、皮膚或血液，只要能分離出一丁點的DNA，就能用PCR加以放大，進行比對。這也是“微量證據”的威力之所在。由1983年美國Mullis首先提出設想，1985年由其發明了聚合酶鏈反應，即簡易DNA擴增法，意味著PCR技術的真正誕生。到如今2013年，PCR已發展到第三代技術。1976年，中國科學家錢嘉韻，發現了穩定的Taq DNA聚合酶，為PCR技術發展也做出了基礎性貢獻。

PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。

PCR基因擴增儀是分子診斷實驗室的重要工具，直接影響臨床檢測結果的準確性、重復性、甚至工作效率。其有著不同的分類與類型，所以我們一定要清楚。

PCR基因擴增儀分類：

1.普通的PCR儀

一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，又叫傳統的PCR儀。

用途：主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進行擴增。

（1）梯度PCR儀

一次PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度)，通常為12種溫度梯度的普通PCR儀。

用途：研究未知DNA退火溫度的擴增。

（2）原位PCR

將具有細胞定位能力的原位雜交技術運用于從細胞內靶DNA的定位分析，在細胞內實現基因擴增的普通PCR儀。

用途：用于在細胞的靶DNA所在位置上進行基因擴增。

2.實時熒光定量PCR儀

PCR擴增時加入的引物利用熒光素進行標記，使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結合，擴增結果通過熒光信號采集系統實時采集信號并輸送到計算機分析處理系統，實時輸出量化結果，這樣的PCR儀叫實時熒光定量PCR儀。

（1）金屬板式實時定量PCR儀

可作為普通PCR儀使用
可帶梯度功能
可容納的樣本量大，無需特殊耗材
溫度均一性欠佳，有邊緣效應，標準曲線的反應條件難以做到與樣品完全一致

（2）離心式實時定量PCR儀

溫度均一性較好
使用的是同一個激發光源和檢測器，隨時檢測旋轉到跟前的樣品，有效減少系統誤差
可容納樣品量少，有的需用特殊毛細管作樣品管，增加了使用成本，也不帶梯度功能

（3）各孔獨立控溫的定量PCR儀

不同樣品槽分別擁有獨立的智能升降溫模塊，各孔獨立控溫，適合多指標快速檢測。