三種細胞活性檢測法比較：發光法、熒光法和吸光度法

瀏覽次數：2402　發布日期：2023-9-7　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

細胞活性檢測已成為現代實驗室的重要工具。高通量細胞活性檢測廣泛應用于篩選實驗，如化合物毒性篩選，或識別選擇性殺死癌細胞的化合物，還有一個常見用途是篩查環境毒素。

酶標儀可利用多種活性檢測試劑盒測定吸光度（Abs）、熒光強度（FI）或化學發光（Lum），以量化細胞活性。如何為自己的研究做出最佳選擇讓用戶犯了愁。

為此，我們選取基于吸光度、熒光和化學發光讀數的三種市售細胞活性檢測試劑盒，分別是CellTiter-Glo 2.0®（Promega）、Alamar blueTM和Vybrant®MTT（均來自Thermo Fisher Scientific；圖1）。為了幫助客戶做選擇，我們使用HeLa細胞，在96孔板和384孔板中置入25-50000個細胞/孔，以建立標準曲線，對動態范圍、檢測下限和檢測上限，以及處理方面的性能進行比較。

圖1. Vybrant MTT、alamarBlue和CellTiter-Glo的細胞活性檢測原理

活性檢測靈敏度的比較

如圖2所示，CellTiter-Glo的檢測下限（LOD）最低，其次是alamarBlue和Vybrant MTT。通常來講，384孔板支持檢測較低的細胞數量，是由于底物/細胞比率較高。

圖2. 使用HeLa細胞比較活性檢測試劑盒的檢測下限

活性檢測動態范圍的比較

在所有測定中都觀察到細胞數量對應的信號有明顯增強。然而，在最大濃度范圍內觀察到的線性關系隨著細胞濃度的升高而減弱（圖3A、B、C）。這種影響可能主要歸因于底物的有限。底物轉換/細胞比率在很大程度上取決于細胞類型和細胞培養條件，如FCS的可用性。在這種情況下，相對活躍的HeLa細胞使轉換/細胞比率增高，使LOD降低，但同時在高細胞濃度下產生初期飽和效應。需要注意的是，制造商提供的建議是一般指導，在必要時，應對一些參數進行檢查，提前根據您的實驗條件進行調整。有可能涉及的調整參數包括細胞總數、細胞與試劑量的比率，以及對應的孵育時間。

圖3. 384孔和96孔板的HeLa細胞活性標準曲線。（A）Vybrant MTT，Abs（B）AlamarBlue，FI（C）CellTiter-Glo，Lum。誤差線代表8次重復

結論

BMG LABTECH的VANTAstar®酶標儀（圖4）擁有高靈敏度，可覆蓋大范圍的細胞活性檢測讀數，提供完美的檢測平臺。配備光柵和光譜儀，在波長選擇方面提供了充分的靈活性，這種靈活性同時體現在活性檢測的選擇。動態范圍擴展技術（EDR）和自動聚焦調整使分析檢測變得更加簡單，無需進行初步增益或聚焦優化。