哺乳動物細胞表達系統是在哺乳動物細胞中生產重組蛋白的廣泛使用的平臺。哺乳動物細胞為蛋白表達提供了幾個優勢，包括進行復雜翻譯后修飾的能力、蛋白質的正確折疊、將蛋白質分泌到細胞外環境中的能力等。哺乳動物細胞表達系統廣泛用于生物技術和制藥工業，用于生產重組蛋白、疫苗、病毒載體和單克隆抗體。
 
      哺乳動物細胞表達載體是專門設計基因在哺乳動物細胞中表達的DNA構建體，載體含有靶基因有效轉錄、翻譯和表達所需的幾個關鍵成分。接下來詳細介紹哺乳細胞蛋白表達載體元件構成，以下是哺乳動物細胞表達載體的主要成分：
 
1.啟動子：
 
       啟動子是一種DNA序列，它位于基因的上游，起著調控轉錄起始的作用，并決定基因表達的水平和特異性。通過募集RNA聚合酶和轉錄因子，啟動子能夠啟動轉錄過程。在哺乳動物細胞表達載體中，常用的強組成型啟動子包括巨細胞病毒（CMV）啟動子、人延伸因子1α（EF1α）啟動子、猿猴空泡病毒40（SV40）啟動子、延伸因子1α（EF1α）啟動子以及人/鼠β肌動蛋白啟動子。這些啟動子能夠確保插入的基因在哺乳動物細胞中得到穩定的表達。
 
2.增強子元件：
 
        增強子元件是一種DNA序列，其功能在于提升啟動子的轉錄活性，進而增強基因的表達。在哺乳動物細胞表達載體的構建中，常常引入源自病毒或細胞的增強子元件，如SV40增強子或人類即時早期巨細胞病毒增強子。這些元件的引入，旨在提高目的基因在哺乳動物細胞中的表達水平。增強子可以位于啟動子區域的上游或下游，并發揮促進靶基因高效表達的作用。
 
3.聚腺苷酸化信號（PolyA信號）：
 
       多腺苷酸化信號，也稱為polyA信號或polyA尾，是在轉錄過程中添加到信使核糖核酸3'端的腺嘌呤核苷酸序列，發出轉錄終止和多聚（C）尾添加到mRNA轉錄物中的信號，在信使核糖核酸的穩定性、從細胞核輸出和翻譯效率方面起著關鍵作用，哺乳動物細胞表達載體通常包含基因下游的polyA信號，以確保適當的mRNA處理和穩定性。
 
4.選擇標記：
 
        選擇標記物是指能夠編碼出對特定抗生素或其他選擇性藥物產生耐藥性的蛋白質的基因。這些標記物通常用于穩定轉染實驗，以便鑒定和分離那些已經將表達載體整合到其基因組中的哺乳動物細胞系。具體實例包括抗生素抗性基因，例如新霉素（neomycin）抗性基因或嘌呤霉素（puromycin）抗性基因，以及能夠賦予細胞對藥物抗性的基因，例如潮霉素抗性基因或殺稻瘟菌素（blasticidin）抗性基因。這些選擇標記物的應用，有助于在細胞培養和基因工程中實現高效、準確的細胞篩選和鑒定。
 
5.復制的起始點（ORI）：
 
        復制的起始點是作為DNA復制起點的DNA序列。在哺乳動物細胞表達載體中，可包含源自哺乳動物病毒（如SV40或牛乳頭瘤病毒（BPV）來源）的ORI，以確保載體DNA在哺乳動物細胞中的有效復制。然而，對于質粒等非病毒載體，細菌ORI（例如ColE1來源）也可能存在于細菌宿主中用于繁殖。
 
6.細菌的選擇性標記：
 
        哺乳動物細胞表達載體通常在細菌宿主如大腸桿菌中繁殖和擴增。因此，它們通常包含細菌生長的選擇性標記，例如抗生素抗性基因（例如，氨芐青霉素或卡那霉素抗性基因），能夠在細菌培養中的克隆和質粒擴增步驟中選擇攜帶表達載體的菌落。
 
7.多克隆位點（MCS）：
 
       多克隆位點（MCS），乃一種簡短的DNA序列，內含多個獨特的限制性內切酶識別位點。MCS通常坐落于啟動子下游以及其他表達元件上游，這些位點通過限制性內切酶的消化與連接作用，為將特定基因方便地插入載體中提供了可能。通過提供多種限制性位點以定向克隆DNA片段，MCS大大簡化了克隆過程。
  
      此外，根據實驗或應用的具體要求，哺乳動物細胞表達載體可以包含其他元件，例如用于蛋白質分泌的信號肽、用于蛋白質檢測和蛋白純化的表位標簽或用于誘導表達的特定調節元件。
 
     通過表達載體基本成分，哺乳動物細胞表達載體能夠在哺乳動物細胞中高效表達基因，用于各種研究、生物技術和治療應用，載體可以根據特定的實驗要求進行定制和優化，包括啟動子、選擇標記和其他調控元件的選擇。