--細 胞 基 本 信 息---
細胞名稱： SW480(人結(jié)腸腺癌細胞)
細胞別稱： SW-480; SW480; SW480E
細胞貨號： SNL-074
生長特性： 貼壁
培養(yǎng)條件： L15+10% FBS+1% P/S （37℃；100%空氣；飽和濕度）
            或DMEM+10% FBS+1% P/S  （37℃；5% CO2；飽和濕度）
細胞簡介： SW480 [SW-480]細胞源自50歲Dukes C結(jié)直腸癌白人男性患者原位直腸腺癌，后來SW620細胞源自同一病人一年后的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。SW480 [SW-480]細胞表達EGF, CSAp和直腸抗體3陰性，角蛋白陽性。SW480 [SW-480]細胞p53基因第273位密碼子的G→A突變引起Arg→His替代，309位密碼子的C→T突變導(dǎo)致Pro→Ser替代。SW480 [SW-480]細胞高水平表達p53蛋白，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達呈陽性，癌基因N-myc的表達未做檢測，不表達Matrilysin（一種與腫瘤侵襲相關(guān)的金屬蛋白酶）。有報道稱，SW480 [SW-480]細胞表達GM-CSF。SW480 [SW-480]細胞ras原癌基因的12位密碼子有一個突變，可以用作PCR法檢測該突變的陽性對照。1978年11月，A·Leibovitz將其提交給ATCC時已傳代至第91代。SW480 [SW-480]細胞可以用于3D細胞培養(yǎng)和癌癥研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。
 
SW480細胞培養(yǎng)注意事項：
 
1. L15培養(yǎng)體系和DMEM培養(yǎng)體系都適用于該細胞
L15 (Leibovitz's L-15)培養(yǎng)基以磷酸鹽和高濃度氨基酸作為緩沖劑，故適合空氣培養(yǎng)，使用L15培養(yǎng)體系時培養(yǎng)箱不可通入CO2；
DMEM培養(yǎng)基以碳酸氫鹽作為緩沖劑，故使用DMEM培養(yǎng)時培養(yǎng)箱需要通入CO2以平衡培養(yǎng)基酸堿度。兩種培養(yǎng)體系下細胞生長速度差異不大，可根據(jù)實驗室具體情況選擇合適的培養(yǎng)體系。
 

• 不同培養(yǎng)體系下細胞形態(tài)不同

使用L15培養(yǎng)體系細胞形態(tài)更扁平，呈多角形；
使用DMEM培養(yǎng)體系養(yǎng)細胞更圓，呈鵝卵石狀或圓形貼壁；  
3. DMEM培養(yǎng)體系下細胞貼壁較慢

使用DMEM培養(yǎng)體系時，SW480復(fù)蘇或傳代后通常需要48h才能完全鋪展開，建議復(fù)蘇或傳代后至少48h再進行換液。  

• 存在黑點

培養(yǎng)時背景中可能有黑點，為細胞代謝產(chǎn)物和細胞碎片，不影響細胞生長。若黑點較多可以在換液時用預(yù)熱的PBS輕輕潤洗。
 
 
SW480細胞傳代攻略

• 準備所需的培養(yǎng)基、胰酶、PBS、離心管、培養(yǎng)瓶以及無菌槍頭等；（試劑提前預(yù)熱）
• 先盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基，再加5mL 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
• T25瓶加1mL胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層，將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
• 消化到細胞明顯回縮，間隙變大，但未完全脫落時加2-3mL完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；

Tips：

• 如果您無法準確掌控胰酶作用時間，建議按照下述操作：胰酶首先復(fù)溫到室溫，PBS潤洗細胞后，將胰酶加入細胞，放入37度培養(yǎng)箱，然后每隔1min拿出觀察一次，如果部分細胞開始自然滑落，說明細胞消化完成，加完全培養(yǎng)基終止消化；否則再等1min秒重復(fù)操作直至細胞能夠自然滑落，不強行將細胞吹下。

• 混勻細胞并轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心3min；
• 在新的培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）
• 離心完成后，棄上清，加入適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中，十字法或8字法混勻，然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，注意培養(yǎng)瓶蓋透氣。

 
Tips：

• 推薦傳代比例1：2，細胞生長至80%密度時即可傳代；
• 消化過程中不要拍打、敲打培養(yǎng)瓶；
• 控制吹打力度輕柔，吹打次數(shù)不能過多（每次重懸吹打不超過10次）
• 接種后在顯微鏡下確認細胞分散為單顆細胞。

 
SW480細胞凍存攻略

• 配制程序性凍存液，準備相應(yīng)數(shù)量凍存管并做好標(biāo)記。

Tips：推薦凍存液配方92%FBS+8%DMSO或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO

• 先將細胞按傳代步驟獲得細胞沉淀；
• 加入適量程序性凍存液輕輕重懸細胞，并將細胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管中；
• 將凍存管放入程序性凍存盒，放入-80℃冰箱過夜；
• 轉(zhuǎn)移凍存細胞至液氮保存并登記細胞保存位置。

Tips：

• 液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測凍存細胞的活性，若活性合格即可長期保存。
• 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用，若使用非程序凍存液請按產(chǎn)品說明書處理降溫過程。
• T25培養(yǎng)瓶長滿通常可凍存2-3管，10cm皿長滿通常可凍存3-4管。
• 凍存密度低將導(dǎo)致復(fù)蘇后細胞狀態(tài)不佳。  

 
SW480細胞復(fù)蘇方法

• 提前將水浴鍋預(yù)熱至37℃，培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫或37℃，離心機設(shè)置好轉(zhuǎn)速；
• 將細胞從液氮罐中取出，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋，將細胞凍存部分浸入水浴鍋迅速搖晃，細胞融化至米粒大小冰塊時終止水浴，融化過程不超過2min；

Tips：

• 若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。
• 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮，取出細胞時震動不要過大。水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮，若有液氮需靜置一會待液氮完全蒸發(fā)后再水浴。做好防護，避免凍存管炸開導(dǎo)致受傷。
• 水浴時使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，避免污染。  
• 直接將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心2min，不同離心機具體轉(zhuǎn)速會有差異
• 離心完成后棄上清，用預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管，輕柔重懸細胞后接種至培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱；
• 復(fù)蘇24小時后觀察細胞貼壁情況。

Tips：整個細胞復(fù)蘇過程在盡可能5-10min內(nèi)完成。
 
SW480細胞收貨攻略

• 常溫細胞

• 收貨后，拆開外包裝，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培養(yǎng)箱靜置4h以上；
• 吸走大部分培養(yǎng)基并留10-12 mL，顯微鏡下拍照保存細胞狀態(tài)照片，觀察細胞密度，若細胞密度大于80%即可按比例傳代（首次傳代比例建議1：2），若細胞密度低于70%可以留10-12 mL繼續(xù)培養(yǎng)至細胞密度80%以上再進行傳代培養(yǎng)；

Tips：若收貨時發(fā)現(xiàn)懸浮細胞較多，應(yīng)離心收集懸浮細胞并放回原瓶

• 凍存細胞

• 細胞收貨后盡快開箱檢查，若干冰充足可以取出細胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天內(nèi)復(fù)蘇）短期保存或液氮中長期保存，若干冰完全揮發(fā)建議立即復(fù)蘇細胞并聯(lián)系銷售人員解決；
• 凍存細胞建議盡快復(fù)蘇一管培養(yǎng)檢查，以免超出售后期，復(fù)蘇步驟參考復(fù)蘇攻略；
• 復(fù)蘇一管細胞出現(xiàn)異常及時聯(lián)系銷售人員，在專業(yè)技術(shù)支持的指導(dǎo)下進行下一步操作；

Tips：

• 細胞收貨出現(xiàn)漏液、培養(yǎng)瓶破損、干冰完全揮發(fā)等異常情況時，及時拍照聯(lián)系銷售人員；
• 尚恩生物T25瓶發(fā)貨的細胞內(nèi)含對應(yīng)細胞的完全培養(yǎng)基，可以收集原裝培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基經(jīng)1500rpm離心5min后，取上清于4℃保存用于后續(xù)細胞培養(yǎng)；

 
常見問題及解決方案
NO.1細胞密度怎么計算的？
嚴格意義上，細胞密度需要收集細胞懸液計數(shù)細胞數(shù)量，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細胞數(shù)量而消化細胞計數(shù)。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部，有細胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當(dāng)然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導(dǎo)致并不嚴謹，但也是相當(dāng)直觀、簡便的表現(xiàn)細胞狀態(tài)的一種方式；
 
NO.2培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理？
1. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加完全培養(yǎng)基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5mL PBS重懸細胞，再離心后，用完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
 
NO.3細胞具體消化時間是多久？
每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能完全規(guī)定消化時間，以實際消化效果和客戶經(jīng)驗為準。 
 
 
產(chǎn)品推薦：
【SNL-074】 SW480 (人結(jié)腸腺癌細胞)
【SNLM-074】SW480細胞專用完全培養(yǎng)基