在2024年發表的一項開創性研究中，波蘭雅蓋隆大學的研究團隊揭示了一種使用聚電解質冷凍保存細胞外囊泡（EVs）的新方法。這一創新方法有望顯著提高EVs的穩定性和功能性，這對于包括組織再生和藥物遞送在內的各種生物醫學應用至關重要。

主要發現：

研究表明，用生物相容性聚電解質（特別是PEG46-b-PMAPTAC52（P1）和PAMPS18（P2））的超薄層包被EVs，可以有效保持其結構完整性和生物活性，在長期儲存表現出色和多次凍融循環中。涂層EVs顯示出更好的穩定性，能夠比未涂層的EVs更好地保持其尺寸和濃度。這種穩定性對于確保EVs療法的有效性至關重要。此外，涂層EVs保留了其對靶細胞（如人類成骨細胞）的積極影響，展示了其在治療應用中的潛力。

Apogee Flow納米流式細胞儀的應用：EVs分析中的重要工具

Apogee Flow納米流式細胞儀在這項研究中發揮了關鍵作用，提供了高分辨率的EVs分析。以下是它如何助力研究成功的：

精確和靈敏度：Apogee Flow納米流式細胞儀的先進功能允許精確測量EVs的尺寸、濃度和表面標記，確保了聚電解質冷凍保護效果的準確評估。

高分辨率分析：其檢測和分析小顆粒（如EVs）的高分辨率能力對于驗證涂層包被EVs的完整性和功能性至關重要。

數據可靠：Apogee Flow納米流式細胞儀的穩健性能確保了數據的一致性和可靠性，這對于開發EVs冷凍保存的標準化過程至關重要。

實驗結果：

首先在EVs表面包被一層PEG46-b- PMAPTAC52層（P1），該層沉積在EVs表面，主要通過EVs負電荷表面與帶正電荷的聚合物之間的吸引靜電相互作用來穩定電動汽車。為了增加這種保護囊泡的穩定性，提高其生物相容性和水分散的穩定性，在EVs上額外包被聚陰離子PAMPS18 (P2)，共同形成P1/P2雙層涂層。

圖1.聚合物的超薄P1層或P1/P2雙分子EVs涂層示意圖。

實驗結果顯示，與新分離的EVs相比，在單次凍融循環后，無論是未包被的EVs，還是包被P1和P1/P2的EVs，RNAselect陽性物體的百分比都有所增加（圖2C）。Apogee Flow納米流式分析比較發與新分離的EVs相比，P1和P1/P2包被的EVs單次凍融后，CD81陽性和CD90陽性物體的百分比均顯著高于新分離的EVs，這表明聚合物的保護作用(圖2C，圖2 D)。

圖2.(C)流式細胞術分析冷凍保護劑對EVs完整性的影響，通過RNASelect染色評估，以及EVs典型抗原（CD81）和間充質細胞（CD90）的存在。(D)一次凍融循環后，Ctrl樣品（無聚合物）和包被P1聚合物的EVs的代表性點圖。

在10次凍融循環后，對照組（未包被）樣品的平均顆粒尺寸略低，在20次凍融循環后，顆粒尺寸顯著減小，這可能表明囊泡部分解體（圖7A）。與未凍融的樣品相比，經過10次和20次凍融循環后，包被P1/P2的EVs樣品的平均顆粒大小沒有明顯變化（圖7A）。Apogee Flow流式細胞術分析證明，與未凍融的EVs樣品相比，涂有P1/P2并經過10或20個凍融循環的EVs樣品中RNAselect陽性顆粒的百分比明顯更高，而未涂有P1/P2的EVs樣品沒有觀察到這種顯著的影響（圖7B）。

圖7.P1/P2存在對EVs多次凍融的影響。

結論：本文提出了一種有效、安全的低溫保護hUC - MSC衍生EVs的新方法，該方法基于生物相容性聚電解質的超薄層逐層涂層技術。利用Apogee高分辨率流式細胞術、蛋白質組學和體外功能分析等互補的定量和定性方法，證明了P1層或P1/P2雙分子層包被的EVs在深度冷凍和解凍時可以保護其結構完整性和生物學功能。蛋白質組學分析證實，在EVs凍融前包被P1/P2雙分子層可以保護其蛋白質分子。該研究的方法是為基礎研究和臨床應用開發EVs長期存儲標準化程序的重要一步。Apogee Flow納米流式細胞儀的使用突顯了高質量分析工具在實現這些科學突破中的重要性。

Apogee Flow納米流式細胞儀的優勢

Apogee Flow納米流式細胞儀具有多項優勢。首先，它具有高靈敏度檢測能力，能夠檢測到小至100納米的顆粒，這對于分析細胞外囊泡、病毒和亞細胞結構等微小顆粒非常重要。其次，儀器配備多達四個空間分離的激光器和12個光學檢測器，能夠進行復雜的多參數分析。此外，Apogee Flow納米流式細胞儀具有高通量能力，能夠每秒處理多達100,000個事件，適合高通量分析。它還支持96孔微孔板自動進樣器，實現高通量和重復性分析，適合各種應用。最后，儀器支持GxP合規，包括自動校準和清洗功能，確保長期穩定性和可靠性。

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