細胞計數常見問題及針對性解決方案:提升計數質量、優化實驗流程
瀏覽次數:366 發布日期:2025-5-29
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在日常細胞實驗中,細胞計數是不可或缺的一步。然而,看似簡單的計數,背后卻隱藏著不少“雷區”。本期我們整理了細胞計數中常見的問題、原因分析及快速解決方案,助你提升實驗效率!
1. 常見的問題、原因分析及快速解決方案
1.1 計數誤差大、重復性差
#可能原因
- 混勻不充分,細胞分布不均
- 使用血球計數板時進樣不規范
- 細胞團聚,單細胞比例低
#快速解決方案
- 吹打混勻 ≥5次再取樣
- 加入DNA酶(如DNase I)或EDTA防止細胞團聚
- 規范操作,避免氣泡進入計數板
1.2 死細胞比例過高
#可能原因
- 胰酶消化時間過長,細胞膜受損
- 離心力過大或時間過長導致細胞受損
- 計數染料(如臺盼藍)濃度不合理
#快速解決方案
- 嚴控消化時間,推薦1–3分鐘觀察狀態
- 軟離心(300–400g,3–5分鐘)
- 使用新鮮、適當濃度的染料(臺盼藍 0.4%常規推薦1:1稀釋)
1.3自動計數系統識別異常
#可能原因
- 背景雜質較多或氣泡干擾
- 設置參數不匹配細胞類型
- 圖像聚焦不清晰,識別誤判
#快速解決方案
- 預過濾細胞懸液(如40 μm濾網)
- 調整識別閾值、大小范圍等算法參數
- 確保樣本放置平穩、系統自動對焦良好
2. 技術加分項:提升計數質量的小技巧
- 細胞懸液濃度控制在 1×10⁵ – 1×10⁶/mL,利于計數準確
- 定期校準自動計數儀器或更換血球板
- 使用帶有自動識別和圖像記錄功能的系統,如NanoEntek EVE明場系列/ADAM熒光系列細胞計數分析儀,可視化追蹤細胞狀態
細胞計數是一個“看起來簡單、做起來精細”的步驟。掌握關鍵細節,避免常見誤區,能顯著提升后續實驗的準確性與可重復性。
接下來將介紹一款世界質量認證白金獎自動細胞計數儀——EVE™ PLUS 超快速自動細胞計數儀,助力實驗準確高效、減少誤差。
3. 設備速覽
EVE™ PLUS超快速自動細胞計數儀計數原理主要基于圖像分析技術,結合染色和先進的算法來實現對細胞的準確計數。以下是其主要工作原理:
#1 臺盼藍染色
在進行計數之前,細胞樣本與臺盼藍染料混合。健康的細胞具有完整的細胞膜,其能夠阻止臺盼藍染料進入細胞內部,但當細胞死亡或者細胞膜受損時,臺盼藍則能夠進入細胞內從而染色細胞質使其呈現藍色。
#2 LED光學系統與CMOS檢測技術
# LED光學系統
LED光源為細胞提供均勻且穩定的照明環境,有助于提高圖像質量和清晰度。
# CMOS檢測技術
結合高靈敏度的CMOS傳感器,EVE™ PLUS能夠捕捉并記錄圖像。CMOS傳感器具有高速、高靈敏度和低噪聲等優點,能夠確保圖像數據的準確性和可靠性。
#3 圖像分析
EVE™ PLUS內置的系統算法會對捕捉到的圖像進行分析。通過識別圖像中的細胞形態和染色特征(如臺盼藍染色的藍色細胞)區分活細胞和死細胞。
#4 計數與數據輸出
根據圖像分析的結果,EVE™ PLUS自動計算出樣本中的細胞總數、活/死細胞數以及細胞活率,并以圖表及圖片格式輸出。
4. 功能簡介
EVE™ PLUS超快速自動細胞計數儀作為一款先進的細胞分析設備,能夠準確、簡單、快速的提供細胞數量以及細胞存活率。其功能具體如下:
4.1 細胞計數&存活率分析
EVE™ PLUS超快速自動細胞計數儀通過臺盼藍染色,可獲得活/死細胞數量以及細胞存活率。
4.2 手動&自動聚焦功能
# 自動聚焦
10秒內獲得細胞總數、活/死細胞數、存活率、細胞濃度和細胞直徑大小等結果。
# 手動聚焦
1秒內獲得細胞總數、活/死細胞數、存活率、細胞濃度和細胞直徑大小等結果。
4.3 細胞大小閥門調節
EVE™ PLUS可自定義調整細胞大小閥門。通過調整閥門大小可排除細胞碎片干擾。
4.4 成團細胞單獨計數
EVE™ PLUS能夠識別和計數成團細胞中的單個細胞,從而進行準確的分析。
4.5 數據存儲
細胞計數完成后,結果可自動存儲在設備中,避免數據丟失。
4.6 網絡連接
EVE™ PLUS提供網卡,可連接WIFI進行郵件發送或者遠程操作。