細(xì)菌生長(zhǎng)的影響因素、測(cè)量方法與科學(xué)應(yīng)用
瀏覽次數(shù):214 發(fā)布日期:2025-5-27
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細(xì)菌廣泛存在于自然界中,從人體微生物群到環(huán)境生態(tài)系統(tǒng),它們?cè)诮】怠⒐I(yè)、農(nóng)業(yè)等多個(gè)領(lǐng)域都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。研究細(xì)菌的生長(zhǎng)過(guò)程不僅有助于理解微生物的生命活動(dòng),還對(duì)醫(yī)學(xué)、食品安全和生物技術(shù)等領(lǐng)域具有重要意義。那么,細(xì)菌是如何生長(zhǎng)的?它們的生長(zhǎng)過(guò)程受哪些因素影響?科學(xué)家們又是如何測(cè)量細(xì)菌生長(zhǎng)的?本文將帶您探討細(xì)菌生長(zhǎng)的基本原理及其測(cè)量方法。
1、細(xì)菌生長(zhǎng):概述及測(cè)量方法
細(xì)菌是生命的基礎(chǔ),在健康、工業(yè)、農(nóng)業(yè)及環(huán)境等領(lǐng)域發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。細(xì)菌的生命過(guò)程可以劃分為不同的階段(圖1)。當(dāng)細(xì)菌被引入新的培養(yǎng)基或環(huán)境時(shí),其生長(zhǎng)通常經(jīng)歷三個(gè)主要階段。在遲滯期(Lag phase),細(xì)菌適應(yīng)新的環(huán)境,但不進(jìn)行細(xì)胞分裂。在指數(shù)生長(zhǎng)期(Exponential phase),細(xì)菌開始分裂,種群數(shù)量以恒定速率倍增。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的快速增殖后,細(xì)菌的生長(zhǎng)速度趨于平衡,即穩(wěn)定期(Stationary phase),此時(shí)細(xì)胞分裂速率與死亡速率相當(dāng)。最終,細(xì)菌進(jìn)入衰亡期(Death phase),細(xì)胞死亡率超過(guò)分裂率。
圖1:微生物生長(zhǎng)曲線——批次培養(yǎng)條件下微生物數(shù)量變化的典型趨勢(shì)。
2、影響細(xì)菌生長(zhǎng)的因素
環(huán)境條件對(duì)細(xì)菌的生命周期有顯著影響。營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH值、氧氣、濕度和滲透壓等因素需加以評(píng)估,以明確其對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響,或加以控制,以便在細(xì)菌檢測(cè)中進(jìn)行精確的生物學(xué)測(cè)量。
此外,細(xì)菌之間的相互作用也可能影響生長(zhǎng)。例如,群體感應(yīng)(Quorum sensing) 是一種依賴于細(xì)菌分泌的化學(xué)信號(hào)分子、細(xì)胞密度及基因表達(dá)變化的細(xì)胞間通訊方式。
3、細(xì)菌生長(zhǎng)的測(cè)量方法
細(xì)菌生長(zhǎng)的測(cè)定方法可分為直接測(cè)量和間接測(cè)量?jī)纱箢悺V苯訙y(cè)量法包括顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)及瓊脂平板菌落計(jì)數(shù),而間接測(cè)量方法則通過(guò)檢測(cè)與細(xì)菌生長(zhǎng)相關(guān)的參數(shù)變化來(lái)評(píng)估生長(zhǎng)情況,如600 nm光密度(OD600)測(cè)定、光散射、熒光或發(fā)光信號(hào)檢測(cè)等。
600 OD值在許多實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)常使用。該方法測(cè)量的是細(xì)菌懸浮液的光散射量,而非其吸收率。隨著細(xì)菌的生長(zhǎng)和分裂,懸浮液的濁度增加,光傳輸相應(yīng)減少,細(xì)菌散射的光也相應(yīng)增加。您可以在BMG LABTECH的博客中閱讀更多關(guān)于使用OD600測(cè)量微生物生長(zhǎng)情況的信息。
濁度儀是一種測(cè)量光散射的專用儀器,也是測(cè)量細(xì)菌生長(zhǎng)的替代方法(圖2),其靈敏度高于基于吸收的方法。BMG LABTECH的NEPHELOstar Plus是一款專用讀數(shù)器,可按照應(yīng)用說(shuō)明“通過(guò)激光散射比濁法監(jiān)測(cè)微生物生長(zhǎng)曲線”所述,以高靈敏度測(cè)量細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的早期階段。
圖2:NEPHELOstar Plus 的測(cè)量原理示意圖。
熒光和化學(xué)發(fā)光測(cè)定同樣可用于細(xì)菌生長(zhǎng)分析,例如,利用目標(biāo)細(xì)菌中可表達(dá)的熒光蛋白以進(jìn)行生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)。在 BMG LABTECH 的應(yīng)用研究《表達(dá)穩(wěn)定綠色熒光蛋白突變體的B組鏈球菌生長(zhǎng)檢測(cè)與監(jiān)測(cè)》中,研究人員使用 GFP 生物標(biāo)記對(duì)液體培養(yǎng)基中的細(xì)菌生長(zhǎng)進(jìn)行追蹤,CLARIOstar® 讀板儀可同時(shí)測(cè)量熒光、吸光度及熒光偏振(圖3)。這些測(cè)量結(jié)果為傳統(tǒng)的OD600提供了更靈敏的替代方案。
此外,在應(yīng)用研究《InToxSa測(cè)定法:定量評(píng)估細(xì)胞內(nèi)金 huang se葡萄球菌(S. aureus) 細(xì)胞毒性表型》中,研究人員利用碘化丙啶(PI)分析S. aureus對(duì)細(xì)胞系的細(xì)胞毒性作用。
其他細(xì)菌生長(zhǎng)的替代性測(cè)量方法包括代謝活性檢測(cè)(熒光重氮青檢測(cè)和ATP測(cè)量)、遺傳學(xué)方法和呼吸測(cè)量(評(píng)估耗氧量)。
圖3:B組鏈球菌(GBS)熒光(GFP+,綠色;GFP-,黑色)在 THB 培養(yǎng)基中的吸光度(A)、熒光強(qiáng)度(B)及偏振熒光(C)變化曲線。
4、細(xì)菌生長(zhǎng)研究的應(yīng)用及微孔板檢測(cè)技術(shù)
細(xì)菌生長(zhǎng)測(cè)定在多個(gè)領(lǐng)域具有重要應(yīng)用,包括醫(yī)學(xué)與健康、食品及環(huán)境監(jiān)測(cè)等。
- 食品行業(yè):研究人員正致力于開發(fā)具有抗菌性能的食品包裝材料。
- 生物醫(yī)學(xué):醫(yī)療器械和植入物的抗菌涂層或保護(hù)性生物膜的研發(fā)也受到了廣泛關(guān)注。
- 環(huán)境監(jiān)測(cè):細(xì)菌生長(zhǎng)測(cè)定可用于評(píng)估水質(zhì)、檢測(cè)污染物及監(jiān)測(cè)生物修復(fù)過(guò)程。
- 生物技術(shù):細(xì)菌廣泛應(yīng)用于生物燃料、酶及其他生物產(chǎn)品的生產(chǎn)。例如,蛋白質(zhì)的基因工程改造及新型藥物的生產(chǎn)過(guò)程往往涉及細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)。
研究人員多年來(lái)一直在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌,通常使用燒瓶。帶有溫度控制和振蕩功能的酶標(biāo)儀可用于細(xì)菌生長(zhǎng)的動(dòng)力學(xué)研究,在不同的持續(xù)時(shí)間內(nèi)幾乎不需要用戶干預(yù)。它們還能夠在各種條件下使用不同的探測(cè)模式進(jìn)行并行測(cè)量。因此,多功能酶標(biāo)儀在細(xì)菌生長(zhǎng)的常規(guī)測(cè)量中具有速度、可再現(xiàn)性和規(guī)模方面的優(yōu)勢(shì)。
5、大氣控制
BMG LABTECH的大氣控制單元(ACU)為研究人員提供了一個(gè)能夠控制氧氣和二氧化碳濃度的系統(tǒng),從而滿足特定氣體條件下的細(xì)菌生長(zhǎng)需求。例如,腦膜炎奈瑟菌在5%的二氧化碳2濃度下生長(zhǎng)旺盛。在應(yīng)用筆記《BMG LABTECH酶標(biāo)儀與大氣控制單元(ACU)中的腦膜炎奈瑟菌生長(zhǎng)》中,證明了這種對(duì)環(huán)境要求苛刻的細(xì)菌可以在BMG LABTECH酶標(biāo)儀上很好地生長(zhǎng),同時(shí)ACU可以提供5%的二氧化碳(圖4)。
圖 5:BMG LABTECH 酶標(biāo)儀配備的試劑注入器能夠以所需的注射速度和注射量進(jìn)行試劑輸送。
BMG LABTECH酶標(biāo)儀可測(cè)量細(xì)菌生長(zhǎng),支持多種應(yīng)用,ACU的使用也為其提供了便利。這些應(yīng)用包括從動(dòng)力學(xué)生長(zhǎng)研究到群體感應(yīng)研究,以及對(duì)抗菌素耐藥性和生物膜的干預(yù)措施。
為何選擇BMG LABTECH解決方案?
吸光度測(cè)量
BMG LABTECH的全系列酶標(biāo)儀均配備超快分光計(jì),可用于 OD600 測(cè)定(NEPHELOstar® Plus 除外,該儀器專用于光散射及濁度測(cè)定)。
熒光與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
BMG LABTECH 提供多模式檢測(cè)設(shè)備,適用于高靈敏度熒光及化學(xué)發(fā)光測(cè)量。
溫度與振蕩控制
BMG LABTECH的所有酶標(biāo)儀均可提供精確的溫度調(diào)節(jié),最高可達(dá)45°C(可選配65°C)及三種可調(diào)速振蕩模式(最高700 rpm,可選配1100 rpm),以優(yōu)化細(xì)菌培養(yǎng)環(huán)境。此外,VANTAstar、CLARIOstar Plus、Omega 系列及 SPECTROstar Nano 還可配備高強(qiáng)度耐用震蕩系統(tǒng),支持24/7連續(xù)實(shí)驗(yàn)。
BMG LABTECH 的多功能酶標(biāo)儀憑借高質(zhì)量測(cè)量、微量實(shí)驗(yàn)體系、短時(shí)間檢測(cè)及實(shí)驗(yàn)成本節(jié)約,成為細(xì)菌生長(zhǎng)研究的理想選擇。
轉(zhuǎn)載自:BMG LABTECH
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