滅菌過程致死率的確定方法——生物指示物/生物負載方法

A.1 總則
    本方法結合了生物指示物對給定周期的抗力和生物負載與抗力方面的知識以建立周期參數（作用時間）。使用本方法要求證明產品的生物負載水平在一定期限內保持相對穩定以及生物負載的抗力小于等于生物指示物的抗力。通過逐步增加作用時間和確定周期的滅活率證明生物指示物的抗力。這一比率和生物負載的菌數及相對抗力方面的知識可用于確定滅菌時間，從而可以預測SAL。
本方法的指南見ISO14161。
A.2 程序
A.2.1 確定產品中最難達到無菌的位置。
A.2.2 將生物指示物放置于產品中最難達到滅菌條件的位置，為滅菌過程創建監測，包括已知的微生物數量和已知的對EO的抗力。如果監測的位置不是最難滅菌的位置，應確定其與最難滅菌位置之間的關系。
使用經證明對滅菌過程的抗力比產品對滅菌過程的抗力大的PCD可滿足本要求。需注意包裝和從PCD中移除滅菌劑的影響。
A.2.3 使用與常規產品相同的包裝方式對上述PCD進行包裝，并放置于被滅菌物品中。
A.2.4 選擇比常規條件具有較小致死性的條件將被滅菌物品暴露于EO中（見第8條），使基準微生物不會被全部滅活。
A.2.5 在EO作用時間遞增而其他參數保持不變之后，使用以下方法之一確定過程的致死性：
a） 直接列舉（見A.3.1）或
b） 部分陰性法（見A.3.2或A.3.3）或
c） a）和b）的組合方法。
注：部分陰性法采用在部分氣體作用時間后PCD復活檢測中有無細菌生長的方法。根據這一結果，可計算出基準微生物的滅活率。
A.2.6 根據產品生物負載方面的知識（見ISO11737-1），生物負載對滅菌過程的抗力和基準微生物的滅活率決定了達到規定SAL所需的處理范圍。
A.3 確定過程致死性
A.3.1 直接列舉
A.3.1.1 采用直接列舉存活微生物創建存活曲線的方法確定滅菌周期的致死性。
A.3.1.2 ISO14161和ISO11138-1：2006 C.3給出了本方法的細節。
ISO11138-1：2006 C.3要求至少有五次作用覆蓋以下方面：
a） 一次作用，樣品沒有暴露于滅菌劑（如：作用時間為0）；
注：沒有滅菌劑或由惰性氣體或媒體代替。
b） 至少一次作用，存活菌數降低至初始菌數的0.01%（降低4log10）；
c） 至少三次作用，覆蓋作用a）和作用b）之間的時間段。
A.3.2 部分陰性法，使用Hocomb-Spearman Karber程序（HSKP）
    用于EO滅菌的生物指示物應暴露于環氧乙烷，作用時間遞增，而其它參數保持不變。作用后，通過直接浸于適當的培養基的方法對測試樣品進行化驗。計算培養后無菌生長的樣品占樣品總數的比率。ISO14161和ISO11138-1：2006 D.3.1給出了本方法的細節。
ISO11135-1：2007
ISO11138-1：2006 D.3.1要求至少有五種作用條件覆蓋以下方面：
a） 至少一組樣品，全部測試樣品顯示有菌生長；
b） 至少兩組樣品，部分樣品顯示有菌生長（量子區）；
c） 至少兩組樣品，顯示無菌生長。
    如果各個時間點的樣品數量相同且時間間隔恒定，可使用更改的HSKP方法：Limited Hocomb-Spearman Karber程序（LHSKP）。進一步信息見ISO11138-1：2006 D.3.2。A.3.3 部分陰性法，使用Stumbo Murphy Cochran程序（SMCP）Stumbo Murphy Cochran程序（SMCP）要求部分陰性范圍內有一個作用時間的結果包含時間t、有菌生長即陰性的單位數量r、重復次數n、及每次的初始污染菌數N0。為使用SMCP程序獲取有效數據，ISO11138-1：2006 D.3.3要求通過至少三次部分陰性運行的平均數計算D值，以對再現性進行確認。
進一步指南見ISO14161。