定點偶聯技術在抗體偶聯藥物（ADC）中的應用
基于工程化氨基酸的定點偶聯
半胱氨酸定點偶聯（THIOMAB技術）
THIOMAB技術是首個利用工程化半胱氨酸殘基實現定點偶聯的方法。通過在抗體重鏈（HC）或輕鏈（LC）的特定位點引入未配對的半胱氨酸，利用硫醇-馬來酰亞胺化學反應實現細胞毒素的精確偶聯。該方法生成的ADC具有近乎均一的藥物-抗體比（DAR），并顯著提高了治療指數。多個基于THIOMAB技術的ADC已進入臨床試驗，然而，并非所有半胱氨酸工程化ADC都取得了臨床成功。
硫醇橋聯偶聯
硫醇橋聯技術利用雙功能連接子捕獲兩個游離的半胱氨酸硫醇基團，生成DAR4的ADC，顯著降低了異質性例。
谷氨酰胺定點偶聯
谷氨酰胺殘基可通過微生物轉谷氨酰胺酶（MTGase）進行酶促修飾，實現定點偶聯。該方法將含胺的細胞毒素或間隔子偶聯至去糖基化抗體的HC-Q295位點，無需使用還原劑或氧化劑。
基于非天然氨基酸的定點偶聯
通過在抗體中引入非天然氨基酸（如對乙酰苯丙氨酸pAF、對疊氮甲基-L-苯丙氨酸pAMF和疊氮賴氨酸），可實現細胞毒素的精確和定量偶聯。該方法生成的ADC具有均一的DAR、高效性和良好的穩定性，但也面臨抗體表達困難和潛在免疫原性等挑戰。
基于糖工程的定點偶聯
糖工程技術利用抗體CH2結構域中的N297糖鏈進行定點偶聯。目前已開發了多種方法將細胞毒素偶聯至糖鏈的不同單糖上，包括巖藻糖、半乳糖、N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）、N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）和唾液酸（SA）。
巖藻糖偶聯
Okeley等人報道了利用6-硫代巖藻糖（一種巖藻糖類似物）進行代謝標記，隨后通過馬來酰亞胺化學反應實現偶聯，生成DAR為1.3的ADC。該方法生成的ADC具有良好的血漿穩定性和顯著的抗腫瘤活性。
半乳糖偶聯
半乳糖或其類似物可通過半乳糖基轉移酶引入抗體。Synaffix的GlycoConnect技術利用內切糖苷酶和糖基轉移酶將天然糖鏈轉化為均一的疊氮標記三糖，隨后通過無金屬點擊化學反應實現偶聯。該技術已應用于多個臨床階段的ADC。
唾液酸偶聯
唾液酸（SA）可通過酶促轉移至抗體，隨后通過高碘酸氧化與含氨氧基的細胞毒素偶聯。另一種方法是通過無銅點擊化學反應將C9-疊氮化SA轉移至抗體，并與含細胞毒素的DBCO偶聯。
糖工程技術的優勢在于無需改變氨基酸序列即可實現糖鏈偶聯，但需要特殊的試劑和酶。
基于短肽標簽的定點偶聯
短肽標簽（通常為4-6個氨基酸）可通過酶促反應實現定點偶聯。
谷氨酰胺標簽偶聯
Strop等人開發了谷氨酰胺標簽（如LLQG），利用MTGase實現細胞毒素的定點偶聯。該方法生成的ADC具有均一的DAR2，并表現出強效的抗腫瘤活性。
轉肽酶介導的偶聯
轉肽酶可催化轉肽反應，實現定點偶聯。
結論
定點偶聯技術，包括工程化氨基酸、非天然氨基酸、糖工程和短肽標簽，顯著推動了ADC的發展，生成了均一性高、治療指數優異的ADC。這些新一代偶聯技術確保了批次間的一致性，并為腫瘤治療領域帶來了更多突破。未來的研究將進一步優化這些技術，推動ADC藥物的進一步發展。
參考文獻
1.Site-Specific Antibody Conjugation for ADC and Beyond.
2.Chemical Linkers in Antibody–Drug Conjugates (ADCs).
3.Site-specific conjugation of a cytotoxic drug to an antibody improves the therapeutic index.
4.Site-Specific Antibody−Drug Conjugation through Glycoengineering.
5.Site-specific conjugation of a cytotoxic drug to an antibody improves the therapeutic index.
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