博來霉素（Bleomycin, BLM）是一種化療藥物，最初用于治療某些類型的癌癥。然而，其副作用之一是可能導致肺纖維化。BLM通過與DNA結合，導致DNA斷裂、自由基產生、氧化應激反應，從而引發細胞凋亡或壞死，進而誘導炎癥反應和纖維化。由于肺纖維化是一種高死亡率、預后極差的疾病，缺乏有效的治療方法，因此BLM誘導的肺纖維化動物模型被廣泛應用于研究肺纖維化的發病機制和開發新藥。

（一）氣管滴注與氣管霧化造模方法對比

1. 氣管滴注法
氣管滴注是BLM誘導肺纖維化模型的常用方法之一。該方法通過將BLM直接注入小鼠氣管，使藥物直達肺部靶器官，引起肺部損傷。氣管滴注法操作簡便、費用較低、可重復性高，且病灶分布均勻。通常，BLM的用量為3.5-5mg/kg，單次給藥后約7天出現炎癥反應，14天發生肺纖維化，21-28天肺纖維化病變最明顯。
優點：

• 方法可靠，劑量小，次數少，制模時間短。
• 操作簡便，適合大規模實驗。
• 藥物直接作用于肺部，肺損傷反應明顯。
• 與人類肺纖維化的病理特征相似。

缺點：

• 可能導致急性肺損傷。
• 纖維化病灶分布以支氣管周圍為顯著，不夠彌散。
• 有窒息風險，需注意操作安全。

2. 氣管霧化法
氣管霧化是一種更先進的給藥方式，通過肺部霧化給藥器將BLM均勻分布于肺部，使藥物顆粒大小為2.5-4 μm，能夠均勻分布并到達胸膜下區域，模擬了人類肺纖維化的臨床特征。與氣管滴注法相比，氣管霧化法不需要穿刺氣管，減少了動物的損傷與痛苦，可作為復制肺纖維化小鼠模型的優選方案。
優點：

• 藥物分布更均勻，纖維化改變更彌散，更接近人類肺纖維化改變。
• 操作簡便，無需穿刺氣管，減少動物痛苦。
• 適合研究鼻腔氣霧劑對肺部病理生理學的影響。

缺點：

• 需要專門的大小鼠吸入霧化設備，比如北京元森凱德生物公司研制生產的小動物氣管肺直接遞送裝置（氣道霧化針）+小動物可視化成像喉鏡或小動物霧化給藥儀

（二）解決方案：降低博來霉素（BLM）誘導小鼠肺纖維化模型的死亡率

1. 使用YSKD  Microsprayer氣管霧化（結合小動物實時可視化成像喉鏡+操作臺），可使得藥物分布更均勻，減少局部高濃度帶來的毒性，降低小鼠死亡率【使用YSKD Bio-tech儀器已經發表的BLM小鼠肺纖維化造模,影響因子18.9、SCI 1區高分文章】

2.計算肺容量/氣管給藥量，BLM小鼠肺纖維化:

2.1小鼠肺容量體積的計算方法：肺容量體積通常通過肺系數（肺濕重/體重） 或灌流法間接估算

肺系數法：處死后迅速取出肺組織稱濕重，計算與體重的比值（肺系數 = 肺濕重 mg / 體重 g）。正常小鼠肺系數約 6–9 mg/g，纖維化模型可升至 12–15 mg/g。

灌流固定法：氣管灌注4%多聚甲醛（10 mL/kg 體重），使肺均勻膨脹至生理狀態后固定，通過排水法或影像學（如微型CT）測量體積。

羥脯氨酸（HYP）含量：作為膠原沉積標志物，間接反映纖維化程度（正常肺HYP ≈ 1–2 μg/mg，纖維化后可達5–8 μg/mg）。

示例計算：若小鼠體重25 g，肺濕重200 mg，則肺系數 = 200 mg / 25 g = 8 mg/g（正常范圍）；若纖維化后肺濕重增至300 mg，則系數為12 mg/g。

2.2氣管霧化給藥量的精確控制

顆粒大小：需控制在 2.5–4 μm，確保均勻分布至肺泡而不沉積于大氣道。

BLM濃度與劑量：

常用濃度：5–7 U/mL（溶于生理鹽水）。

單次給藥量：40–50 μL/只（如5 U/kg BLM）。

3.避免肺泡損傷的關鍵操作

麻醉深度控制：

麻醉劑：戊巴比妥鈉（75 mg/kg 腹腔注射），以足趾反射消失為深度標準。過淺易引發嗆咳，過深則抑制呼吸；需在操作后30分鐘內恢復自主呼吸。

給藥容積限制：

單次給藥量≤ 50 μL（小鼠肺總容量約1–1.5 mL），過量易致肺泡破裂。

PM2.5混懸液等聯合給藥時，需按 5 mg/kg 折算體積。

體位與恢復：

霧化時小鼠仰臥于30°斜坡，促進藥物均勻分布。

術后置于37℃加熱墊，直至完全清醒（通常需10–15分鐘）。

（三）案例分享：博來霉素（BLM）氣管霧化誘導小鼠肺纖維化模型

空軍軍醫大學唐都醫院&西京醫院科研團隊在(影響因子18.9、SCI 1區)Bioactive Materials 32 (2024) 488–501發表《Profibrogenic macrophage-targeted delivery of mitochondrial protector via exosome formula for alleviating pulmonary fibrosis》, 在肺纖維化這一病理過程中，促纖維化巨噬細胞亞群發揮著至關重要的作用，這使得該亞群的特征至關重要。較高的肺巨噬細胞與纖維化呈正相關。

在CD206+ M2的Mømitohigh亞群中，以動力蛋白Drp1的高表達為特征，所有雄性C57BL/6小鼠（8-10周）被安置在一個特定的無病原體（SPF）動物設施中，所有動物實驗程序均經空軍軍醫大學動物實驗與倫理委員會批準。C57BL/6小鼠用1%戊巴比妥鈉（50 mg/kg）麻醉，使用北京元森凱德生物技術有限公司（BEI JING YSKD BIO-TECHNOLOGY CO.,LTD）研制生產的動物霧化吸入相關儀器對PBS稀釋的BLM博來霉素（5U/kg，40μl/小鼠）進行氣管霧化肺纖維化疾病造模，通過流式細胞術和RNA-seq分析，基于外泌體的治療干預，不僅確定了Mømitohigh為促纖維化巨噬細胞，而且還提供了一種通過可配制的外泌體組合來逆轉PF的有效策略。

附：北京元森凱德生物技術有限公司研制生產的動物霧化吸入給藥儀器，主要包括大/小動物肺部氣管直接遞送裝置（動物氣道霧化針）、動物口鼻吸入、僅鼻腔給藥、全身式暴露染毒、動物煙氣/PM2.5染毒系統、粉塵氣溶膠發生器、臭氧動物暴露裝置、動物高低壓氧艙，此外給客戶多樣化提供自動型實驗動物安樂死系統（窒息系統、二氧化碳安樂處死箱），實驗動物除臭暫存系統，巴馬香豬皮，NGI Gentle Rocker智能洗盤裝置，NGI新一代撞擊器和ACI安德森撞擊器的校驗與檢測。