帶狀皰疹（Herpes Zoster, HZ）是由潛伏在脊髓背根或顱神經(jīng)節(jié)內(nèi)的水痘-帶狀皰疹病毒（Varicella-Zoster Virus, VZV）經(jīng)再激活后所致的急性感染性皮膚疾病。水痘-帶狀皰疹病毒又稱人類皰疹病毒3型（HHV-3），為雙鏈DNA病毒，長(zhǎng)度約 125 kb，在所有已知的皰疹病毒中最小。

目前尚無治療VZV感染的特效藥物，接種疫苗是一種有效的主動(dòng)免疫防控策略。從2006年開始，數(shù)種水痘-帶狀皰疹疫苗被各國(guó)逐漸批準(zhǔn)，用于預(yù)防帶狀皰疹及其并發(fā)癥的發(fā)生。

帶狀皰疹下游純化工藝解決方案
• 減毒疫苗：

• 重組蛋白疫苗：

博格隆重組帶狀皰疹疫苗純化案例

博格隆已為多種類型重組帶狀皰疹的下游純化提供解決方案，包括純化工藝和層析介質(zhì)。

本文所展示的案例采用“復(fù)合模式層析+疏水層析+陰離子層析+復(fù)合模式層析”的四步層析法，最終滿足質(zhì)量要求——四步層析后樣品SEC純度大于97 %，HCP殘留小于300 ppm（Cygnus試劑盒檢測(cè)）。

與傳統(tǒng)純化方案相比，四步層析法去掉了分子篩的步驟，完成重組帶狀皰疹的下游純化工藝過程。

1. 捕獲階段

第一步捕獲階段使用了復(fù)合模式層析填料。復(fù)合模式層析填料結(jié)合了不同類型的相互作用，如離子相互作用、氫鍵作用和疏水相互作用。使用該類型填料純化后的樣品純度通常可大于90 %。

此外，復(fù)合模式離子交換填料對(duì)鹽離子具有一定的耐受性，一般樣品中含有不高于30 mS/cm鹽不會(huì)影響其吸附，因此可以相應(yīng)降低樣品的稀釋比例，從而減少工藝時(shí)間和成本。

捕獲階段主要去除了大量雜質(zhì)并降低了HCP含量。本案例在該階段使用了Diamond MIX-A填料純化某重組帶狀皰疹疫苗。

• 填料：Diamond MIX-A

• 樣品：某重組帶狀皰疹疫苗發(fā)酵液上清

• 層析柱規(guī)格/柱高：BXK 16/20，柱高10 cm

• 純化結(jié)果：SDS-PAGE電泳圖譜顯示5號(hào)洗脫樣品泳道除目的蛋白條帶外，無明顯雜質(zhì)條帶，且SEC純度>90 %，HCP殘留由原液的十幾萬ppm降低至幾千ppm，約28倍。

2. 中度純化階段

第二步中度純化階段使用疏水層析介質(zhì)。選擇疏水填料的關(guān)鍵在于選擇合適疏水強(qiáng)弱的配基。常見配基的疏水性強(qiáng)弱順序：Butyl-S＜Butyl＜Octyl＜Phenyl。

疏水填料通常采用結(jié)合洗脫模式，將樣品高鹽條件下上樣，常使用鹽濃度遞減的梯度從柱上洗脫樣品。隨著離子強(qiáng)度的降低，分子的親水區(qū)暴露增加，分子按疏水性遞增的順序從柱上洗脫出來。

中度純化階段進(jìn)一步去除樣品中的雜質(zhì)和降低HCP殘留。本案例在該階段使用Diamond Butyl Mustang填料純化某重組帶狀皰疹疫苗。

• 填料：Diamond Butyl Mustang

• 樣品：Diamond MIX-A洗脫處理后樣品

• 層析柱規(guī)格/柱高：BXK 16/20，柱高10 cm

Fig.2 Diamond Butyl Mustang純化某重組帶狀皰疹疫苗層析圖譜（左）和SDS-PAGE結(jié)果（右）

• 純化結(jié)果：SEC檢測(cè)純度提高了約3 %，HCP殘留降低至2000 ppm左右。

Table 2.Diamond Butyl Mustang技術(shù)參數(shù)
3. 精純階段

第三步精純階段使用陰離子層析+復(fù)合型強(qiáng)陰離子層析介質(zhì)。陰離子層析介質(zhì)偶連帶正電的功能基團(tuán)（如季銨基、二乙氨基乙基），在中性條件下，能夠和帶負(fù)電荷的內(nèi)毒素、HCD、HCP等雜質(zhì)結(jié)合，因此陰離子層析是去除內(nèi)毒素等雜質(zhì)的一個(gè)關(guān)鍵步驟。

本案例在精純階段使用Diamond Q和Diamond MIX-A Mustang填料純化某重組帶狀皰疹疫苗。Diamond MIX-A Mustang相較Diamond MIX-A粒徑更小，分辨率更高。

• 填料：Diamond Q

• 樣品：Diamond Butyl Mustang洗脫樣品

• 層析柱規(guī)格/柱高：EzScreen 4.9 mL，柱高10 cm

Fig.3 Diamond Q純化某重組帶狀皰疹疫苗層析圖譜（左）和SDS-PAGE結(jié)果（右）

• 純化結(jié)果：SEC檢測(cè)純度無明顯提高，HCP殘留降低至幾百ppm。

• 填料：Diamond MIX-A Mustang

• 樣品：Diamond Q洗脫樣品

• 層析柱規(guī)格/柱高：EzScreen 4.9 mL，柱高10 cm

• 純化結(jié)果：SDS-PAGE電泳圖譜顯示洗脫樣品泳道背景干凈，無可見雜質(zhì)條帶，SEC檢測(cè)純度提高至97 %以上，HCP殘留降低至200 ppm左右。

結(jié)論

使用博格隆四步層析法純化后，該重組帶狀皰疹疫苗最終SEC純度>97 %，HCP殘留降低至200 ppm左右，最終收率、純度和HCP殘留量均符合客戶要求。但是不同類型的帶狀皰疹，種類不同，質(zhì)量要求不同，因此，層析填料的屬性要求也可能存在差異。

除標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品外，博格隆還提供定制化解決方案，為您解決下游層析工藝研發(fā)、生產(chǎn)及工藝變更等過程中遇到的難題。

關(guān)于博格隆

博格隆成立于2008年，是一家專注于為分離純化提供高質(zhì)量層析介質(zhì)的高新技術(shù)企業(yè)，是中國(guó)較早具備大規(guī)模生產(chǎn)分離純化介質(zhì)能力的企業(yè)之一。博格隆所提供的產(chǎn)品涵蓋各類分離純化介質(zhì)、預(yù)裝柱、實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)生產(chǎn)級(jí)空柱、微載體，同時(shí)提供分離純化工藝開發(fā)服務(wù)及填料定制。